| 设备名称 | 发酵罐 |
| 设备型号 | Minifors 5.0 | 设备编号 | 2008909801 |
| 生产/供应商 | 济南超想商贸有限公司 | 国别 | 瑞士 |
| 设备金额 | 195075 | 购置年月 | 2008.03 |
| 收费标准 | * |
| 现有功能与服务范围 | 用于各种微生物或各种微生物产物的发酵 |
| 年使用机时数 | * | 设备存放地点 | 兽医综合楼114 |
| 主要技术指标 | 1. 罐体：总容积为5升,工作容积为3.5升。采用Duran玻璃作为罐体材质。 2. 罐盖：材质选用316L不锈钢，外包特氟龙的橡胶材质的O型圈密封，直径均为19mm的无菌和耐压孔，适于无菌接种操作、取样、补料等。
3. 马达：机械搅拌采用交流变频马达，转速为：100~1250rpm，转速精度: ≤1rpm，使用顶部搅拌。
4. 搅拌：搅拌系统为2档6平叶搅拌桨，带挡板，可拆卸；并带扰流系统
5. 进气和排气：采用高分子纤维的无菌空气过滤器；带粒子流量计，配有通气管及气体分布器，最大通气量可达10L/min
6.温控系统：通过电加热系统和冷却系统调节温度，温度范围：高于冷却水温度5℃-60℃
7. 配备Pt100温度传感器，罐体内温度的测量和控制范围是0-100度，精度+/-0.1度，可自动控制发酵过程的温度；
8. 配备能高温高压灭菌的复合型PH电极，能对发酵过程中的PH值进行全自动PID控制，控制精度+/-0.01，数字显示。
9. 配备能高温高压灭菌的极谱型溶氧电极，能对发酵过程中的溶氧进行全自动PID控制，控制上可与转速、通气速度、补料等实现三联动、数字显示。
10. 配备6台蠕动泵，蠕动泵能进行整体高压灭菌，将发酵过程中的污染风险降至最低，能实现自动补料，补料最小值为0.1毫升/分，最大为10毫升/分。配备补料瓶，能用于无菌补料。
11. 冷却水系统：带体积为15L的外循环冷却水装置两套、一套为出气冷凝器专用、一套为罐体控温用循环水专用。
12.洁净压缩空气机：每分钟产气量不少与16L、输出压力分档可调、带除油除尘装置、输出为洁净的压缩空气。 |
| 操作规程 | 一、灭菌前处理
1．校准PH电极：
2．检查溶解氧电极电解液：
3．加培养基：
4．安装试剂瓶
5．安装PH和溶解氧电极：
6．接种口的安装：
7．采样瓶的安装，将采样瓶的管子和采样管连接好，并用扎带扎紧。
8． 封口：将所有气体进口和传感器接口封好。
二、灭菌和灭菌后安装
1． 将组装好的罐体连同支架和试剂瓶一起放入灭菌锅灭菌。
2． 灭菌后先将罐体和支架放回主机原位上，将导热块安装回去，拧紧将罐体固定好，再放下搅拌马达传动把手，使之伏贴。
3． 将所有的铝箔取掉，将PH电极的红色螺帽取掉。
4． 连接所有传感器：将温度传感器插入至套筒底部，将PH传感器连接线拧紧，将PO2传感器对应接口形状插入并旋转至红色突起可见，将消泡黑色探头插入罐盖的小孔，红色探头插入消泡电极的小孔。
5． 将各个蠕动泵的泵头从支架上取下，按照各试剂瓶内所装的溶液，对应酸、碱、消泡、补料插到主机左上相应的位置上。
6． 将各进气口快插口插好，出气口冷凝器的进出水口插好。
三、初步运行和溶解氧电极的校准
1． 打开主机和电脑的电源开关，开启空压机和气体钢瓶，将进气压力调至2bar（0.2Mpa）。
2． 开启主机进水和出气口冷却器进水，开启各个气体的转子流量计到最大的气体流速。
3． 将发酵罐主机的各个功能开启，方法是：按F键切换功能，再每个功能下按启动/停止键“⊙”启动该功能。
4 ．开启Iris V5软件，选择File－>New新建一个发酵程序，选择Minifors0（一台电脑连接单台发酵罐，如果连接多台，每台都按照对应编号选择），“下一步”后在Fermentation处输入此次发酵的编号，在Initial phase选择Innoculation，再“下一步”后选择所需控制的参数（将对应参数选至右边方框内即可，参数详解见过程控制部分），再“下一步”－>“完成”后，即可开始发酵控制过程。如需修改设定值，在开启发酵控制过程后，用鼠标左键双击该参数，然后直接修改setpoint选项的参数即可。注意：此时该参数的setpoint remote选项须挑勾，否则不起作用。
5． 校准溶解氧：按功能键“F”进入PO2功能，然后按菜单键“□”到显示Cal，按“＋”键选择1，再按启动/停止键“⊙”进入校准过程。然后按“＋/－”键直接将数值改为100，再按启动/停止键“⊙”确认数值。此时仪器会显示End，PO2校准完成。
四、 接种
将接种口的塞子取下，在接种口内倒入少量酒精，点燃，在点燃期间将已经取好菌液的针筒在火焰上灼烧后，穿刺进硅胶塞，注入菌液，完成后再次倒入少量酒精，点燃灭菌后，将塞子旋上即可。
五、 发酵过程控制
1． 大部分发酵参数的控制均为自动完成，只需在软件中设定目标值即可。
例外的参数：
Feed补料泵：在一般的发酵实验中，该泵会被设定为固定数值，须按F键，切换至泵选项，然后按菜单键“□”到左侧显示屏显示Fed，然后按启动/停止键“⊙”将右侧显示屏的Aut改为000，然后在Iris软件上，将Feed_pump的Setpoint改为预期设定值即可。
六、 采样
在采样瓶的滤膜出接上针筒，松开采样管的夹子，抽吸针筒，待菌液抽出后，将夹子夹紧，以无菌操作的方式取掉采样瓶，换上新的采样瓶即可。注意：在一次采样过后，采样管中会残留部分菌液，在下一次采样时须先弃掉部分菌液，以确保采样的真实性。
七、 停止发酵和清理
1． 停止发酵：发酵结束后，先关闭软件的发酵控制过程，即直接点击Iris软件窗口右上角下方的小“×”，然后关闭发酵罐的各个参数控制功能，最后关闭发酵罐电源，发酵过程就会停止，此时所有的功能都将停止工作。
2． 收集发酵液：如果需要收集发酵液，可将发酵罐罐盖取下，直接倒出发酵液即可。
3． 试剂瓶和管路清理：将试剂瓶中的试剂去掉，清洗后换上蒸馏水，开启发酵罐主机，然后在泵菜单内，将所须清理的泵的设定改为100，泵即开始导入蒸馏水，清洗管路，清洗完毕后去掉蒸馏水即可。更改设定的方法为：须按F键，切换至泵选项，然后按菜单键“□”到左侧显示屏显示相应的泵名称（如Aci，Bas，AF或Fed），然后按启动/停止键“⊙”将右侧显示屏的Aut改为000，然后按“＋/－”键直接将数值改为100即可。
4． 罐体清理：在发酵结束后，在将需要收集的发酵液收集后，可加入适量的水，再次灭菌。灭菌后将罐盖去掉，罐内壁和搅拌桨等处如有固体物残留可用塑料刷子清理，之后用水冲洗即可。
5． 电极清理和保存：电极可以分别取下用蒸馏水冲洗，PH电极和PO2电极须取下保存，PH电极须放在电极保护液中保存，溶氧电极须加保护套。
6． 接口的清理：所有接口需清理干净，接种口需取下保存。
7． 断水断电：所有清理完毕后，将总进水、进气的阀门关闭。
八、 日常维护
1． PH电极的维护：PH电极顶端不可被硬物摩擦，每次完成发酵实验后须将PH电极拆下，用洗瓶冲洗，再用滤纸吸干水分后，放入电极保护液（一般为弱酸性3mol/L KCl溶液）中浸泡保存，严禁泡在蒸馏水中。如果PH电极示数不稳定或校准效果不好请联系我公司或直接更换PH电极。
2． PO2电极的维护：PO2电极每次使用完毕需将电极的透析膜浸入到蒸馏水中，保持透析膜的湿润，如透析膜发生变形、破裂，则须更换透析膜。如果长时间不使用PO2电极，则须将透析膜内的电解液倒出，晾干后保存。如PO2电极在测量稳定系统的溶解氧时，示数有明显波动，则需检查透析膜和内部的电解液是否充足，如透析膜完好且电解液充足，请联系我公司或直接更换溶解氧电极。
3． 密封性和管路的维护：请定期（一般是3个月）检查一次，所有日常拆卸的接口的密封圈和各个管子，是否完好，有无破损和变形，是否弹性良好。如果密封圈或管子老化，则须订购更换。
4 搅拌轴承的维护：搅拌轴承内的润滑剂为85%的甘油，需要定期补充，建议每1~2个月检查一次，重新注入润滑剂。补充方法：将搅拌轴承处标有“Lub”的洞内的螺丝取下，用针筒注入甘油直至有液体冒出，再上紧该螺丝即可。 |
| 责任单位 | 山东农业大学动物科技学院 | 实验室 | 兽医平台公用实验室 |
